DNA核酸染料加入多长时间?

时间:2019-02-11 10:37   365bet体育在线中文网  

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电泳后,必须留下核酸以形成这种带。通常使用以下核酸染色剂。最常用的荧光核酸(EB)染料可以插入双链核酸的成对碱基之间。
由于EB?DNA复合物中EB发出的荧光是游离凝胶中EB的10倍,因此可以在不洗涤背景的情况下清楚地观察到核酸带图案。
如果EB的底部太深,将凝胶浸入1 mmol / L MgSO 4中1小时,或10 mmol / L MgCl 2浸泡5分钟,使未结合的EB脱色并检测10 ng DNA样品。EB也可用于检测单链DNA或RNA。然而,其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率相对较低。
向凝胶中加入终浓度为0或使用缓冲液。
在5μg/ ml的EB下,可以在电泳期间进行染色,并且可以在任何时间观察核酸的移动。
但是,EB是带正电的。当插入碱基时,核酸分子的刚性增加并且迁移率降低。因此,它不适合测量核酸的分子量。此时,请在电泳后将凝胶浸入0℃。
染色在EB水溶液中以5μg/ ml进行10分钟。
EB很容易分解,必须在4°C的黑暗中储存。吖啶橙(AO):吖啶橙可以插入双链核碱基对之间,并在UV激发下发射540nm绿色荧光。由于单链核酸与磷酸基团的静电结合,在254nm的紫外光激发也在640nm处引起红色荧光。
因此,可以通过灵敏度0区分单链和双链核酸。
1μg和0。
05微克
然而,吖啶橙的染色操作是严格的,应该是22℃,0℃。
01 mol / L磷酸钠缓冲液(pH 7)。
0)在黑暗中浸泡30分钟后,在4℃下用缓冲液脱色过夜或在22℃下在搪瓷盘中脱色1-2小时。
银试剂(Ag +):Ag +与核酸形成稳定的复合物,然后使用甲醛将Ag +还原成银颗粒。
诸如AgNO 3的试剂可以在聚丙烯酰胺凝胶中制备双链,双链DNA和RNA深棕色。
银染法的灵敏度比EB染色的灵敏度高约200倍,蓝染料的染色比EB染色的染色高100-1000倍。
对于5mm厚的凝胶,可以检测到0。
5ng RNA的特异性较低,缺点是能够与蛋白质和洗涤剂反应生成咖啡,DNA染色不准确。
银稳定地与DNA结合并对DNA具有不利影响,并且不适合于制备DNA片段的回收。
4,亚甲基蓝(亚甲蓝)可能有蓝色RNA,但灵敏度不高,操作时间会很长。
着色过程:将粘合剂浸泡在0。
02%亚甲基蓝,10mmol / L Tris?Ac(pH8)。
3)在4°C下放置1-2小时,用清水冲洗5~8小时(反复更换水)。可以用肉眼确认带的类型,最小检测量为250ng。